1、定量PCR的模版既可以使總DNA，也可以是cDNA，但兩種做法的用途不同如果用總DNA做模版，你檢測的就是總DNA的拷貝數(shù)如果以cDNA為模版，你檢測的就是某個基因的表達水平。

2、你好，你要擴增哪里，那里就是你的說的目的片段和基因本身沒有什么具體關系可以擴增基因內(nèi)的一部分序列內(nèi)含子也好外顯子也好內(nèi)含子+外顯子也好，可以擴增基因外的間隔序列，完全是根據(jù)實驗需要來定的。

3、PCR合成的時候當然不只是需要引物，模板鏈也就是目的基因片段是必須的因為DNA聚合酶合成DNA時只能從一段已有的DNA片段往上加脫氧核苷酸延伸子鏈，而不能從頭合成，所以需要一段引物引物就是目的基因在5#39段的一小段序列。

4、TE溶解更容易，更主要的原因是利用EDTA螯合金屬離子，因為金屬離子是DNA酶的輔基，這樣就可以防止DNA被降解不過，這跟做PCR沒有什么關系，如果模板不是長期保存的，我就用雙蒸水溶解，做PCR效果和TE溶解的一樣TE只是習慣上用來。

5、PCR技術的基本原理該技術是在模板DNA引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反應DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中。

6、PCR的原理該技術是在模板DNA引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段。

7、應該是指樣品中DNA樣品的來源或種類例如，如果提取的是基因組DNA，由于基因組DNA數(shù)量比較多，引物可能會與多個位點結(jié)合，需要優(yōu)化PCR條件，否則可能獲得非特異擴增，或是沒有擴增結(jié)果而如果純化的是質(zhì)粒DNA，模板復雜度就低。

8、除非你做巢式PCR以PCR產(chǎn)物作為模板，首先必須保證你的PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化，成分單一，因此，無論怎樣，第一輪PCR產(chǎn)物都要進行純化，并且必須使用高保真酶以減少堿基錯配的可能這樣才能以第一輪PCR產(chǎn)物為模板進行第二輪擴增。

9、兩個都可以雙鏈當然可以，單鏈的話只要與其中一個引物結(jié)合延伸，就成雙鏈了。